Cảm ơn bạn đã truy cập nature.com. Phiên bản trình duyệt bạn đang sử dụng có hỗ trợ CSS hạn chế. Để có trải nghiệm tốt nhất, chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng phiên bản trình duyệt mới nhất (hoặc tắt chế độ tương thích trong Internet Explorer). Ngoài ra, để đảm bảo hỗ trợ liên tục, trang web này sẽ không bao gồm các kiểu định dạng hoặc JavaScript.
Melamine là một chất gây ô nhiễm thực phẩm đã được công nhận, có thể có mặt trong một số loại thực phẩm cả do vô tình và cố ý. Mục đích của nghiên cứu này là để xác minh việc phát hiện và định lượng melamine trong sữa công thức và sữa bột cho trẻ sơ sinh. Tổng cộng 40 mẫu thực phẩm thương mại, bao gồm sữa công thức và sữa bột, từ các vùng khác nhau của Iran đã được phân tích. Hàm lượng melamine gần đúng của các mẫu được xác định bằng hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao kết hợp với tia cực tím (HPLC-UV). Một đường cong hiệu chuẩn (R2 = 0,9925) đã được xây dựng để phát hiện melamine trong khoảng 0,1–1,2 μg mL−1. Giới hạn định lượng và phát hiện lần lượt là 1 μg mL−1 và 3 μg mL−1. Hàm lượng melamine đã được kiểm tra trong sữa công thức và sữa bột cho trẻ sơ sinh, và kết quả cho thấy mức melamine trong các mẫu sữa công thức và sữa bột lần lượt là 0,001–0,095 mg kg−1 và 0,001–0,004 mg kg−1. Các giá trị này phù hợp với luật pháp EU và Codex Alimentarius. Điều quan trọng cần lưu ý là việc tiêu thụ các sản phẩm sữa có hàm lượng melamine giảm không gây ra rủi ro đáng kể cho sức khỏe người tiêu dùng. Điều này cũng được chứng minh bằng kết quả đánh giá rủi ro.
Melamine là một hợp chất hữu cơ có công thức phân tử C3H6N6, được điều chế từ cyanamide. Nó có độ hòa tan rất thấp trong nước và chứa khoảng 66% nitơ. Melamine là một hợp chất công nghiệp được sử dụng rộng rãi với nhiều ứng dụng hợp pháp trong sản xuất nhựa, phân bón và thiết bị chế biến thực phẩm (bao gồm bao bì thực phẩm và đồ dùng nhà bếp)1,2. Melamine cũng được sử dụng làm chất mang thuốc để điều trị bệnh tật. Tỷ lệ nitơ cao trong melamine có thể dẫn đến việc lạm dụng hợp chất này và truyền các đặc tính của phân tử protein cho các thành phần thực phẩm3,4. Do đó, việc thêm melamine vào các sản phẩm thực phẩm, bao gồm cả các sản phẩm từ sữa, làm tăng hàm lượng nitơ. Vì vậy, người ta đã kết luận sai rằng hàm lượng protein trong sữa cao hơn thực tế.
Cứ mỗi gam melamine được thêm vào, hàm lượng protein trong thực phẩm sẽ tăng thêm 0,4%. Tuy nhiên, melamine rất dễ tan trong nước và có thể gây ra những tác hại nghiêm trọng hơn. Việc thêm 1,3 gam melamine vào các sản phẩm dạng lỏng như sữa có thể làm tăng hàm lượng protein trong sữa lên 30%5,6. Mặc dù melamine được thêm vào thức ăn cho động vật và thậm chí cả con người để tăng hàm lượng protein7, nhưng Ủy ban Codex Alimentarius (CAC) và các cơ quan chức năng quốc gia vẫn chưa phê duyệt melamine là phụ gia thực phẩm và đã liệt kê nó là chất nguy hiểm nếu nuốt phải, hít phải hoặc hấp thụ qua da. Năm 2012, Cơ quan Nghiên cứu Ung thư Quốc tế của Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) đã xếp melamine vào nhóm chất gây ung thư loại 2B vì nó có thể gây hại cho sức khỏe con người8. Tiếp xúc lâu dài với melamine có thể gây ung thư hoặc tổn thương thận2. Melamine trong thực phẩm có thể kết hợp với axit cyanuric để tạo thành các tinh thể màu vàng không tan trong nước, có thể gây tổn thương mô thận và bàng quang, cũng như ung thư đường tiết niệu và giảm cân9,10. Chất này có thể gây ngộ độc thực phẩm cấp tính và, ở nồng độ cao, có thể gây tử vong, đặc biệt là ở trẻ sơ sinh và trẻ nhỏ.¹¹ Tổ chức Y tế Thế giới (WHO) cũng đã đặt mức tiêu thụ hàng ngày có thể chấp nhận được (TDI) của melamine đối với con người ở mức 0,2 mg/kg trọng lượng cơ thể mỗi ngày dựa trên hướng dẫn của CAC.¹² Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ (US FDA) đã đặt mức dư lượng tối đa cho melamine ở mức 1 mg/kg trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh và 2,5 mg/kg trong các loại thực phẩm khác.^2,7 Vào tháng 9 năm 2008, có báo cáo rằng một số nhà sản xuất sữa công thức trong nước đã thêm melamine vào sữa bột để tăng hàm lượng protein trong sản phẩm của họ, dẫn đến ngộ độc sữa bột và gây ra một vụ ngộ độc melamine trên toàn quốc khiến hơn 294.000 trẻ em bị bệnh và hơn 50.000 trẻ phải nhập viện.¹³
Việc cho con bú sữa mẹ không phải lúc nào cũng khả thi do nhiều yếu tố khác nhau như khó khăn trong cuộc sống đô thị, mẹ hoặc con bị ốm, dẫn đến việc sử dụng sữa công thức để nuôi trẻ sơ sinh. Kết quả là, các nhà máy đã được thành lập để sản xuất sữa công thức có thành phần càng giống sữa mẹ càng tốt¹⁴. Sữa công thức bán trên thị trường thường được làm từ sữa bò và thường được pha chế với hỗn hợp đặc biệt gồm chất béo, protein, carbohydrate, vitamin, khoáng chất và các hợp chất khác. Để gần giống sữa mẹ hơn, hàm lượng protein và chất béo trong sữa công thức thay đổi, và tùy thuộc vào loại sữa, chúng được bổ sung các hợp chất như vitamin và khoáng chất như sắt¹⁵. Vì trẻ sơ sinh là nhóm đối tượng nhạy cảm và có nguy cơ bị ngộ độc, nên việc đảm bảo an toàn khi tiêu thụ sữa bột là vô cùng quan trọng đối với sức khỏe. Sau vụ ngộ độc melamine ở trẻ sơ sinh Trung Quốc, các quốc gia trên thế giới đã đặc biệt chú ý đến vấn đề này, và sự nhạy cảm trong lĩnh vực này cũng tăng lên. Do đó, việc tăng cường kiểm soát sản xuất sữa công thức là đặc biệt quan trọng để bảo vệ sức khỏe của trẻ sơ sinh. Có nhiều phương pháp phát hiện melamine trong thực phẩm, bao gồm sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC), điện di, phương pháp cảm quan, quang phổ và xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme kháng nguyên-kháng thể16. Năm 2007, Cục Quản lý Thực phẩm và Dược phẩm Hoa Kỳ (FDA) đã phát triển và công bố phương pháp HPLC để xác định melamine và axit cyanuric trong thực phẩm, đây là phương pháp hiệu quả nhất để xác định hàm lượng melamine17.
Nồng độ melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh được đo bằng kỹ thuật quang phổ hồng ngoại mới dao động từ 0,33 đến 0,96 miligam trên kilogam (mg kg-1). 18 Một nghiên cứu ở Sri Lanka cho thấy mức melamine trong sữa bột nguyên kem dao động từ 0,39 đến 0,84 mg kg-1. Ngoài ra, các mẫu sữa công thức nhập khẩu chứa mức melamine cao nhất, lần lượt là 0,96 và 0,94 mg/kg. Các mức này thấp hơn giới hạn quy định (1 mg/kg), nhưng cần có chương trình giám sát để đảm bảo an toàn cho người tiêu dùng. 19
Một số nghiên cứu đã kiểm tra hàm lượng melamine trong sữa công thức dành cho trẻ sơ sinh của Iran. Khoảng 65% mẫu chứa melamine, với mức trung bình là 0,73 mg/kg và mức tối đa là 3,63 mg/kg. Một nghiên cứu khác báo cáo rằng hàm lượng melamine trong sữa công thức dao động từ 0,35 đến 3,40 μg/kg, với mức trung bình là 1,38 μg/kg. Nhìn chung, sự hiện diện và hàm lượng melamine trong sữa công thức dành cho trẻ sơ sinh của Iran đã được đánh giá trong nhiều nghiên cứu khác nhau, với một số mẫu chứa melamine vượt quá giới hạn tối đa do các cơ quan quản lý quy định (2,5 mg/kg/lần cho ăn).
Xét đến lượng tiêu thụ trực tiếp và gián tiếp khổng lồ của sữa bột trong ngành công nghiệp thực phẩm và tầm quan trọng đặc biệt của sữa công thức trong việc nuôi dưỡng trẻ em, nghiên cứu này nhằm mục đích xác thực phương pháp phát hiện melamine trong sữa bột và sữa công thức. Cụ thể, mục tiêu đầu tiên của nghiên cứu này là phát triển một phương pháp định lượng nhanh chóng, đơn giản và chính xác để phát hiện sự pha trộn melamine trong sữa công thức và sữa bột bằng cách sử dụng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) và phát hiện tia cực tím (UV); Thứ hai, mục tiêu của nghiên cứu này là xác định hàm lượng melamine trong sữa công thức và sữa bột được bán trên thị trường Iran.
Các thiết bị được sử dụng để phân tích melamine khác nhau tùy thuộc vào địa điểm sản xuất thực phẩm. Phương pháp phân tích HPLC-UV nhạy và đáng tin cậy đã được sử dụng để đo dư lượng melamine trong sữa và sữa công thức cho trẻ sơ sinh. Các sản phẩm từ sữa chứa nhiều protein và chất béo có thể gây nhiễu quá trình đo melamine. Do đó, như Sun et al. 22 đã lưu ý, cần có một chiến lược làm sạch thích hợp và hiệu quả trước khi phân tích bằng thiết bị. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã sử dụng bộ lọc syringe dùng một lần. Chúng tôi đã sử dụng cột C18 để tách melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh và sữa bột. Hình 1 cho thấy sắc ký đồ để phát hiện melamine. Ngoài ra, tỷ lệ thu hồi của các mẫu chứa 0,1–1,2 mg/kg melamine dao động từ 95% đến 109%, phương trình hồi quy là y = 1,2487x − 0,005 (r = 0,9925), và giá trị độ lệch chuẩn tương đối (RSD) dao động từ 0,8 đến 2%. Dữ liệu hiện có cho thấy phương pháp này đáng tin cậy trong phạm vi nồng độ nghiên cứu (Bảng 1). Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của melamine lần lượt là 1 μg mL−1 và 3 μg mL−1. Ngoài ra, phổ UV của melamine cho thấy một dải hấp thụ ở bước sóng 242 nm. Phương pháp phát hiện này nhạy, đáng tin cậy và chính xác. Phương pháp này có thể được sử dụng để xác định nồng độ melamine một cách thường quy.
Một số tác giả đã công bố các kết quả tương tự. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao-mảng điốt quang (HPLC) đã được phát triển để phân tích melamine trong các sản phẩm sữa. Giới hạn định lượng thấp nhất là 340 μg kg−1 đối với sữa bột và 280 μg kg−1 đối với sữa công thức cho trẻ sơ sinh ở bước sóng 240 nm. Filazzi et al. (2012) báo cáo rằng melamine không được phát hiện trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh bằng HPLC. Tuy nhiên, 8% mẫu sữa bột có chứa melamine ở mức 0,505–0,86 mg/kg. Tittlemiet et al.23 đã tiến hành một nghiên cứu tương tự và xác định hàm lượng melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh (mẫu số: 72) bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao-khối phổ/khối phổ (HPLC-MS/MS) là khoảng 0,0431–0,346 mg kg−1. Trong một nghiên cứu được thực hiện bởi Venkatasamy et al. (2010), phương pháp hóa học xanh (không sử dụng acetonitrile) và sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo (RP-HPLC) đã được sử dụng để ước tính hàm lượng melamine trong sữa công thức và sữa mẹ. Phạm vi nồng độ mẫu từ 1,0 đến 80 g/mL và đáp ứng tuyến tính (r > 0,999). Phương pháp này cho thấy tỷ lệ thu hồi từ 97,2–101,2% trong phạm vi nồng độ từ 5–40 g/mL và độ lặp lại nhỏ hơn 1,0% độ lệch chuẩn tương đối. Hơn nữa, LOD và LOQ quan sát được lần lượt là 0,1 g mL−1 và 0,2 g mL−124. Lutter et al. (2011) đã xác định sự nhiễm bẩn melamine trong sữa bò và sữa công thức dành cho trẻ sơ sinh bằng phương pháp HPLC-UV. Nồng độ melamine dao động từ < 0,2 đến 2,52 mg kg−1. Khoảng động tuyến tính của phương pháp HPLC-UV là 0,05 đến 2,5 mg kg−1 đối với sữa bò, 0,13 đến 6,25 mg kg−1 đối với sữa công thức cho trẻ sơ sinh có hàm lượng protein <15%, và 0,25 đến 12,5 mg kg−1 đối với sữa công thức cho trẻ sơ sinh có hàm lượng protein 15%. Kết quả LOD (và LOQ) lần lượt là 0,03 mg kg−1 (0,09 mg kg−1) đối với sữa bò, 0,06 mg kg−1 (0,18 mg kg−1) đối với sữa công thức cho trẻ sơ sinh có hàm lượng protein <15%, và 0,12 mg kg−1 (0,36 mg kg−1) đối với sữa công thức cho trẻ sơ sinh có hàm lượng protein 15%, với tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu là 3 và 1025 đối với LOD và LOQ. Diebes et al. (2012) đã nghiên cứu nồng độ melamine trong các mẫu sữa công thức và sữa bột cho trẻ sơ sinh bằng phương pháp HPLC/DMD. Trong sữa công thức, nồng độ thấp nhất và cao nhất lần lượt là 9,49 mg kg−1 và 258 mg kg−1. Giới hạn phát hiện (LOD) là 0,05 mg kg−1.
Javaid et al. báo cáo rằng dư lượng melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh nằm trong khoảng 0,002–2 mg kg−1 bằng phương pháp quang phổ hồng ngoại biến đổi Fourier (FT-MIR) (LOD = 1 mg kg−1; LOQ = 3,5 mg kg−1). Rezai et al.27 đề xuất phương pháp HPLC-DDA (λ = 220 nm) để ước tính melamine và đạt được LOQ là 0,08 μg mL−1 đối với sữa bột, thấp hơn mức thu được trong nghiên cứu này. Sun et al. đã phát triển phương pháp RP-HPLC-DAD để phát hiện melamine trong sữa lỏng bằng phương pháp chiết pha rắn (SPE). Họ thu được LOD và LOQ lần lượt là 18 và 60 μg kg−128, nhạy hơn so với nghiên cứu hiện tại. Montesano et al. đã xác nhận tính hiệu quả của phương pháp HPLC-DMD để đánh giá hàm lượng melamine trong các chất bổ sung protein với giới hạn định lượng là 0,05–3 mg/kg, kém nhạy hơn so với phương pháp được sử dụng trong nghiên cứu này29.
Không thể phủ nhận rằng các phòng thí nghiệm phân tích đóng vai trò quan trọng trong việc bảo vệ môi trường bằng cách giám sát các chất gây ô nhiễm trong các mẫu khác nhau. Tuy nhiên, việc sử dụng một lượng lớn thuốc thử và dung môi trong quá trình phân tích có thể dẫn đến sự hình thành các chất cặn nguy hại. Do đó, hóa học phân tích xanh (GAC) được phát triển vào năm 2000 để giảm thiểu hoặc loại bỏ các tác động bất lợi của các quy trình phân tích đối với người vận hành và môi trường26. Các phương pháp phát hiện melamine truyền thống bao gồm sắc ký, điện di, điện di mao quản và xét nghiệm miễn dịch liên kết enzyme (ELISA) đã được sử dụng để xác định melamine. Tuy nhiên, trong số nhiều phương pháp phát hiện, cảm biến điện hóa đã thu hút nhiều sự chú ý do độ nhạy, độ chọn lọc tuyệt vời, thời gian phân tích nhanh và đặc tính thân thiện với người dùng30,31. Công nghệ nano xanh sử dụng các con đường sinh học để tổng hợp vật liệu nano, có thể giảm thiểu việc tạo ra chất thải nguy hại và tiêu thụ năng lượng, từ đó thúc đẩy việc thực hiện các hoạt động bền vững. Ví dụ, các vật liệu nano tổng hợp được làm từ các vật liệu thân thiện với môi trường có thể được sử dụng trong cảm biến sinh học để phát hiện các chất như melamine32,33,34.
Nghiên cứu cho thấy phương pháp chiết tách vi pha rắn (SPME) được sử dụng hiệu quả nhờ hiệu suất năng lượng và tính bền vững cao hơn so với các phương pháp chiết tách truyền thống. Tính thân thiện với môi trường và hiệu suất năng lượng của SPME khiến nó trở thành một lựa chọn thay thế tuyệt vời cho các phương pháp chiết tách truyền thống trong hóa học phân tích và cung cấp một phương pháp chuẩn bị mẫu bền vững và hiệu quả hơn35.
Năm 2013, Wu và cộng sự đã phát triển một cảm biến sinh học cộng hưởng plasmon bề mặt (mini-SPR) có độ nhạy và độ chọn lọc cao, sử dụng sự liên kết giữa melamine và kháng thể chống melamine để nhanh chóng phát hiện melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh bằng phương pháp miễn dịch. Cảm biến sinh học SPR kết hợp với phương pháp miễn dịch (sử dụng albumin huyết thanh bò liên hợp với melamine) là một công nghệ dễ sử dụng và chi phí thấp với giới hạn phát hiện chỉ 0,02 μg mL-136.
Nasiri và Abbasian đã sử dụng một cảm biến di động có điện thế cao kết hợp với vật liệu composite graphene oxide-chitosan (GOCS) để phát hiện melamine trong các mẫu thương mại37. Phương pháp này cho thấy độ chọn lọc, độ chính xác và phản hồi cực cao. Cảm biến GOCS thể hiện độ nhạy đáng kể (239,1 μM−1), phạm vi tuyến tính từ 0,01 đến 200 μM, hằng số ái lực là 1,73 × 104 và LOD lên đến 10 nM. Hơn nữa, một nghiên cứu được thực hiện bởi Chandrasekhar et al. vào năm 2024 đã áp dụng một phương pháp thân thiện với môi trường và tiết kiệm chi phí. Họ đã sử dụng chiết xuất vỏ đu đủ làm chất khử để tổng hợp các hạt nano oxit kẽm (ZnO-NPs) bằng phương pháp thân thiện với môi trường. Sau đó, một kỹ thuật quang phổ micro-Raman độc đáo đã được phát triển để xác định melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh. Các hạt nano ZnO có nguồn gốc từ chất thải nông nghiệp đã chứng minh tiềm năng như một công cụ chẩn đoán có giá trị và một công nghệ đáng tin cậy, chi phí thấp để theo dõi và phát hiện melamine38.
Alizadeh et al. (2024) đã sử dụng nền tảng huỳnh quang khung kim loại hữu cơ (MOF) có độ nhạy cao để xác định melamine trong sữa bột. Khoảng tuyến tính và giới hạn phát hiện thấp hơn của cảm biến, được xác định bằng 3σ/S, lần lượt là 40 đến 396,45 nM (tương đương 25 μg kg−1 đến 0,25 mg kg−1) và 40 nM (tương đương 25 μg kg−1). Khoảng này thấp hơn nhiều so với mức dư lượng tối đa (MRL) được đặt ra để xác định melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh (1 mg kg−1) và các mẫu thực phẩm/thức ăn chăn nuôi khác (2,5 mg kg−1). Cảm biến huỳnh quang (terbium (Tb)@NH2-MIL-253(Al)MOF) đã chứng minh độ chính xác cao hơn và khả năng đo lường chính xác hơn so với HPLC39 trong việc phát hiện melamine trong sữa bột. Các cảm biến sinh học và vật liệu nano tổng hợp trong hóa học xanh không chỉ nâng cao khả năng phát hiện mà còn giảm thiểu tác hại đến môi trường, phù hợp với các nguyên tắc phát triển bền vững.
Các nguyên tắc hóa học xanh đã được áp dụng vào nhiều phương pháp xác định melamine. Một cách tiếp cận là phát triển phương pháp chiết tách vi pha rắn phân tán xanh bằng cách sử dụng polyme phân cực tự nhiên β-cyclodextrin liên kết chéo với axit citric để chiết xuất melamine hiệu quả 40 từ các mẫu như sữa công thức trẻ em và nước nóng. Một phương pháp khác sử dụng phản ứng Mannich để xác định melamine trong mẫu sữa. Phương pháp này không tốn kém, thân thiện với môi trường và có độ chính xác cao với phạm vi tuyến tính từ 0,1–2,5 ppm và giới hạn phát hiện thấp 41. Hơn nữa, một phương pháp tiết kiệm chi phí và thân thiện với môi trường để định lượng melamine trong sữa tươi và sữa công thức trẻ em đã được phát triển bằng cách sử dụng quang phổ truyền hồng ngoại biến đổi Fourier với độ chính xác cao và giới hạn phát hiện lần lượt là 1 ppm và 3,5 ppm 42. Những phương pháp này chứng minh việc ứng dụng các nguyên tắc hóa học xanh vào việc phát triển các phương pháp hiệu quả và bền vững để xác định melamine.
Một số nghiên cứu đã đề xuất các phương pháp cải tiến để phát hiện melamine, chẳng hạn như sử dụng chiết pha rắn và sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC)43, cũng như sắc ký lỏng hiệu năng cao nhanh (HPLC), không yêu cầu xử lý sơ bộ phức tạp hoặc thuốc thử ghép ion, do đó giảm lượng chất thải hóa học44. Những phương pháp này không chỉ cung cấp kết quả chính xác để xác định melamine trong các sản phẩm sữa mà còn tuân thủ các nguyên tắc hóa học xanh, giảm thiểu việc sử dụng hóa chất độc hại và giảm tác động môi trường tổng thể của quá trình phân tích.
Bốn mươi mẫu thuộc các nhãn hiệu khác nhau đã được kiểm tra ba lần, và kết quả được trình bày trong Bảng 2. Nồng độ melamine trong các mẫu sữa công thức và sữa bột dao động từ 0,001 đến 0,004 mg/kg và từ 0,001 đến 0,095 mg/kg, tương ứng. Không có sự thay đổi đáng kể nào được quan sát thấy giữa ba nhóm tuổi sử dụng sữa công thức. Ngoài ra, melamine được phát hiện trong 80% sữa bột, nhưng 65% sữa công thức bị nhiễm melamine.
Hàm lượng melamine trong sữa bột công nghiệp cao hơn so với sữa công thức cho trẻ sơ sinh, và sự khác biệt này có ý nghĩa thống kê (p<0,05) (Hình 2).
Kết quả thu được thấp hơn giới hạn do FDA quy định (dưới 1 và 2,5 mg/kg). Ngoài ra, kết quả phù hợp với giới hạn do CAC (2010) và EU45,46 quy định, tức là giới hạn tối đa cho phép là 1 mg kg-1 đối với sữa công thức cho trẻ sơ sinh và 2,5 mg kg-1 đối với các sản phẩm từ sữa.
Theo một nghiên cứu năm 2023 của Ghanati et al.47, hàm lượng melamine trong các loại sữa đóng gói khác nhau ở Iran dao động từ 50,7 đến 790 μg kg−1. Kết quả của họ thấp hơn giới hạn cho phép của FDA. Kết quả của chúng tôi thấp hơn so với Shoder et al.48 và Rima et al.49. Shoder et al. (2010) phát hiện thấy rằng nồng độ melamine trong sữa bột (n=49) được xác định bằng ELISA dao động từ 0,5 đến 5,5 mg/kg. Rima et al. đã phân tích dư lượng melamine trong sữa bột bằng phương pháp quang phổ huỳnh quang và thấy rằng hàm lượng melamine trong sữa bột là 0,72–5,76 mg/kg. Một nghiên cứu đã được tiến hành tại Canada vào năm 2011 để theo dõi nồng độ melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh (n=94) bằng phương pháp sắc ký lỏng/khối phổ (LC/MS). Nồng độ melamine được phát hiện thấp hơn giới hạn cho phép (tiêu chuẩn sơ bộ: 0,5 mg kg−1). Khó có khả năng mức melamine gian lận được phát hiện là một thủ đoạn nhằm tăng hàm lượng protein. Tuy nhiên, điều này không thể được giải thích bằng việc sử dụng phân bón, di dời nội dung thùng chứa hoặc các yếu tố tương tự. Hơn nữa, nguồn gốc của melamine trong sữa bột nhập khẩu vào Canada không được tiết lộ50.
Hassani và cộng sự đã đo hàm lượng melamine trong sữa bột và sữa tươi trên thị trường Iran năm 2013 và thu được kết quả tương tự. Kết quả cho thấy, ngoại trừ một nhãn hiệu sữa bột và sữa tươi, tất cả các mẫu khác đều bị nhiễm melamine, với nồng độ dao động từ 1,50 đến 30,32 μg g−1 trong sữa bột và từ 0,11 đến 1,48 μg ml−1 trong sữa tươi. Đáng chú ý, axit cyanuric không được phát hiện trong bất kỳ mẫu nào, làm giảm khả năng ngộ độc melamine đối với người tiêu dùng. 51 Các nghiên cứu trước đây đã đánh giá nồng độ melamine trong các sản phẩm sô cô la có chứa sữa bột. Khoảng 94% mẫu nhập khẩu và 77% mẫu của Iran có chứa melamine. Nồng độ melamine trong các mẫu nhập khẩu dao động từ 0,032 đến 2,692 mg/kg, trong khi đó ở các mẫu của Iran dao động từ 0,013 đến 2,600 mg/kg. Nhìn chung, melamine được phát hiện trong 85% mẫu, nhưng chỉ có một nhãn hiệu cụ thể có mức độ vượt quá giới hạn cho phép.44 Tittlemier et al. báo cáo mức melamine trong sữa bột dao động từ 0,00528 đến 0,0122 mg/kg.
Bảng 3 tóm tắt kết quả đánh giá rủi ro cho ba nhóm tuổi. Rủi ro thấp hơn 1 ở tất cả các nhóm tuổi. Do đó, không có rủi ro sức khỏe không gây ung thư nào từ melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh.
Mức độ ô nhiễm thấp hơn trong các sản phẩm sữa có thể là do ô nhiễm không chủ ý trong quá trình chế biến, trong khi mức độ cao hơn có thể là do cố ý thêm vào. Hơn nữa, nguy cơ tổng thể đối với sức khỏe con người khi tiêu thụ các sản phẩm sữa có hàm lượng melamine thấp được coi là thấp. Có thể kết luận rằng việc tiêu thụ các sản phẩm chứa hàm lượng melamine thấp như vậy không gây ra bất kỳ rủi ro nào cho sức khỏe người tiêu dùng52.
Xét đến tầm quan trọng của quản lý an toàn thực phẩm trong ngành công nghiệp sữa, đặc biệt là về bảo vệ sức khỏe cộng đồng, việc phát triển và thẩm định phương pháp đánh giá và so sánh hàm lượng và dư lượng melamine trong sữa bột và sữa công thức cho trẻ sơ sinh là vô cùng quan trọng. Một phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao kết hợp quang phổ UV đơn giản và chính xác đã được phát triển để xác định hàm lượng melamine trong sữa công thức và sữa bột. Phương pháp này đã được thẩm định để đảm bảo độ tin cậy và chính xác. Giới hạn phát hiện và định lượng của phương pháp cho thấy độ nhạy đủ để đo hàm lượng melamine trong sữa công thức và sữa bột. Theo dữ liệu của chúng tôi, melamine được phát hiện trong hầu hết các mẫu của Iran. Tất cả các mức melamine được phát hiện đều thấp hơn giới hạn cho phép tối đa do CAC quy định, cho thấy việc tiêu thụ các loại sản phẩm sữa này không gây rủi ro cho sức khỏe con người.
Tất cả các hóa chất được sử dụng đều thuộc loại tinh khiết phân tích: melamine (2,4,6-triamino-1,3,5-triazine) độ tinh khiết 99% (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); acetonitrile loại HPLC (Merck, Darmstadt, Đức); nước siêu tinh khiết (Millipore, Morfheim, Pháp). Bộ lọc syringe dùng một lần (Chromafil Xtra PVDF-45/25, kích thước lỗ 0,45 μm, đường kính màng 25 mm) (Macherey-Nagel, Düren, Đức).
Để chuẩn bị mẫu, người ta đã sử dụng bể siêu âm (Elma, Đức), máy ly tâm (Beckman Coulter, Krefeld, Đức) và HPLC (KNAUER, Đức).
Đã sử dụng máy sắc ký lỏng hiệu năng cao (KNAUER, Đức) được trang bị đầu dò UV. Điều kiện phân tích HPLC như sau: sử dụng hệ thống UHPLC Ultimate được trang bị cột phân tích ODS-3 C18 (4,6 mm × 250 mm, kích thước hạt 5 μm) (MZ, Đức). Dung môi HPLC (pha động) là hỗn hợp TFA/methanol (450:50 mL) với tốc độ dòng chảy 1 mL/min. Bước sóng phát hiện là 242 nm. Thể tích tiêm là 100 μL, nhiệt độ cột là 20 °C. Vì thời gian lưu của thuốc dài (15 phút), nên lần tiêm tiếp theo cần được thực hiện sau 25 phút. Melamine được xác định bằng cách so sánh thời gian lưu và đỉnh phổ UV của các chất chuẩn melamine.
Dung dịch chuẩn melamine (10 μg/mL) được pha chế bằng nước và bảo quản trong tủ lạnh (4 °C) tránh ánh sáng. Pha loãng dung dịch gốc với pha động và chuẩn bị các dung dịch chuẩn làm việc. Mỗi dung dịch chuẩn được tiêm vào HPLC 7 lần. Phương trình hiệu chuẩn 10 được tính toán bằng phân tích hồi quy diện tích đỉnh xác định và nồng độ xác định.
Sữa bột bò thương mại (20 mẫu) và các mẫu sữa công thức dành cho trẻ sơ sinh từ sữa bò của các nhãn hiệu khác nhau (20 mẫu) được mua từ các siêu thị và hiệu thuốc địa phương ở Iran để cho trẻ sơ sinh ở các nhóm tuổi khác nhau (0–6 tháng, 6–12 tháng và >12 tháng) bú và được bảo quản ở nhiệt độ lạnh (4 °C) cho đến khi phân tích. Sau đó, cân 1 ± 0,01 g sữa bột đã được đồng nhất hóa và trộn với hỗn hợp acetonitrile:nước (50:50, v/v; 5 mL). Hỗn hợp được khuấy trong 1 phút, sau đó được siêu âm trong bể siêu âm trong 30 phút, và cuối cùng được lắc trong 1 phút. Hỗn hợp sau đó được ly tâm ở 9000 × g trong 10 phút ở nhiệt độ phòng và phần dịch nổi được lọc vào lọ đựng mẫu tự động 2 ml bằng bộ lọc syringe 0,45 μm. Sau đó, dịch lọc (250 μl) được trộn với nước (750 μl) và tiêm vào hệ thống HPLC10,42.
Để kiểm định phương pháp, chúng tôi đã xác định độ thu hồi, độ chính xác, giới hạn phát hiện (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) và độ lặp lại trong điều kiện tối ưu. LOD được định nghĩa là hàm lượng mẫu có chiều cao đỉnh gấp ba lần mức nhiễu nền. Mặt khác, LOQ được định nghĩa là hàm lượng mẫu có chiều cao đỉnh gấp 10 lần tỷ lệ tín hiệu trên nhiễu.
Đáp ứng của thiết bị được xác định bằng cách sử dụng đường cong hiệu chuẩn gồm bảy điểm dữ liệu. Các hàm lượng melamine khác nhau đã được sử dụng (0, 0,2, 0,3, 0,5, 0,8, 1 và 1,2). Tính tuyến tính của quy trình tính toán melamine đã được xác định. Ngoài ra, một số mức melamine khác nhau đã được thêm vào các mẫu trắng. Đường cong hiệu chuẩn được xây dựng bằng cách tiêm liên tục dung dịch melamine chuẩn với nồng độ 0,1–1,2 μg mL−1 vào các mẫu sữa công thức cho trẻ sơ sinh và sữa bột, và hệ số tương quan R2 = 0,9925. Độ chính xác được đánh giá bằng độ lặp lại và độ tái lập của quy trình và đạt được bằng cách tiêm mẫu vào ngày đầu tiên và ba ngày tiếp theo (mỗi ngày ba lần). Độ lặp lại của phương pháp được đánh giá bằng cách tính toán RSD % cho ba nồng độ melamine khác nhau được thêm vào. Các nghiên cứu về độ thu hồi đã được thực hiện để xác định độ chính xác. Mức độ thu hồi bằng phương pháp chiết xuất được tính toán ở ba mức nồng độ melamine (0,1, 1,2, 2) trong các mẫu sữa công thức cho trẻ sơ sinh và sữa bột9,11,15.
Lượng tiêu thụ hàng ngày ước tính (EDI) được xác định bằng công thức sau: EDI = Ci × Cc/BW.
Trong đó, Ci là hàm lượng melamine trung bình, Cc là lượng sữa tiêu thụ và BW là cân nặng trung bình của trẻ em.
Phân tích dữ liệu được thực hiện bằng phần mềm SPSS 24. Tính chuẩn tắc được kiểm tra bằng phép thử Kolmogorov-Smirnov; tất cả dữ liệu đều là các phép thử phi tham số (p = 0). Do đó, phép thử Kruskal-Wallis và phép thử Mann-Whitney được sử dụng để xác định sự khác biệt có ý nghĩa thống kê giữa các nhóm.
Ingelfinger, Jr. Melamine và tác động của nó đối với ô nhiễm thực phẩm toàn cầu. Tạp chí Y học New England 359(26), 2745–2748 (2008).
Lynch, RA, et al. Ảnh hưởng của độ pH đến sự di chuyển của melamine trong bát ăn của trẻ em. Tạp chí Quốc tế về Ô nhiễm Thực phẩm, 2, 1–8 (2015).
Barrett, MP và Gilbert, IH. Nhắm mục tiêu các hợp chất độc hại vào bên trong ký sinh trùng Trypanosoma. Tiến bộ trong Ký sinh trùng học 63, 125–183 (2006).
Nirman, MF, et al. Đánh giá trong ống nghiệm và trên cơ thể sống của dendrimer melamine như là phương tiện vận chuyển thuốc. Tạp chí Dược học Quốc tế, 281(1–2), 129–132(2004).
Tổ chức Y tế Thế giới. Các cuộc họp chuyên gia 1–4 để xem xét các khía cạnh độc học của melamine và axit cyanuric (2008).
Howe, AK-C., Kwan, TH và Lee, PK-T. Độc tính của melamine và thận. Tạp chí của Hiệp hội Thận học Hoa Kỳ 20(2), 245–250 (2009).
Ozturk, S. và Demir, N. Phát triển chất hấp phụ IMAC mới để xác định melamine trong các sản phẩm sữa bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC). Tạp chí Tổng hợp và Phân tích Thực phẩm 100, 103931 (2021).
Chansuvarn, V., Panic, S. và Imim, A. Phương pháp xác định melamine đơn giản bằng quang phổ trong sữa lỏng dựa trên phản ứng Mannich xanh. Spectrochem. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. 113, 154–158 (2013).
Deabes, M. và El-Habib, R. Xác định melamine trong sữa công thức cho trẻ sơ sinh, sữa bột và mẫu cá basa bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao/mảng diode. Tạp chí Độc chất học Phân tích Môi trường, 2(137), 2161–0525.1000137 (2012).
Skinner, KG, Thomas, JD, và Osterloh, JD Độc tính của Melamine. Tạp chí Độc chất Y học, 6, 50–55 (2010).
Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), Độc tính và các khía cạnh sức khỏe của melamine và axit cyanuric: Báo cáo cuộc họp chuyên gia hợp tác WHO/FAO được Bộ Y tế Canada hỗ trợ, Ottawa, Canada, ngày 1-4 tháng 12 năm 2008 (2009).
Korma, SA, et al. Nghiên cứu so sánh thành phần lipid và chất lượng của sữa công thức dành cho trẻ sơ sinh dạng bột có chứa các lipid cấu trúc chức năng mới và sữa công thức thương mại. Nghiên cứu và Công nghệ Thực phẩm Châu Âu 246, 2569–2586 (2020).
El-Waseef, M. và Hashem, H. Nâng cao giá trị dinh dưỡng, thuộc tính chất lượng và thời hạn sử dụng của sữa công thức cho trẻ sơ sinh bằng cách sử dụng dầu cọ. Tạp chí Nghiên cứu Nông nghiệp Trung Đông 6, 274–281 (2017).
Yin, W., et al. Sản xuất kháng thể đơn dòng chống melamine và phát triển phương pháp ELISA cạnh tranh gián tiếp để phát hiện melamine trong sữa tươi, sữa bột và thức ăn chăn nuôi. Tạp chí Hóa học Nông nghiệp và Thực phẩm 58(14), 8152–8157 (2010).